药典 中核酸残留限量规定

WHO 和各国药物注册监管机构一般只允许生物制剂中 存在100 pg/剂 量以下的残留DNA ， 特殊情况下 不大于 10ng/剂量。 根据杂质来源和 纯化 工艺 的 不同 ，一般 酵母、大肠杆菌表达的生物制品中DNA残留量不超过10ng/剂 量，Vero和MDCK细胞表达的疫苗 等生物 制品 中 DNA残留量 不超过100pg/剂量或10pg/剂量 （根据宿主细胞和给药方式的不同，限量要求不同） 。

 

DENARASE® 全能核酸酶

DENARASE®全能核酸酶 是一款通过微生物发酵生产的基因工程 非限制性 核酸内切 酶，其基因序列来自粘质沙雷菌（ Serratia marcescens ）， 生产菌株是一种安全级别为S1级且不含内毒素的 革兰氏阳性 芽孢杆菌（ Bacillus.sp. ） ， 大大 降低了内毒素污染风险 。 DENARASE® 是c-LEcta GmbH 公司 在欧盟、美国、中国、印度、日本和韩国的注册商标 （ https://denarase.com/ ） 。 其拥有的自主 专利生产工艺 ， 完全采用 非动物性原料 ， 不添加抗生素 ，符合 欧盟GMP 生产标准 ， 通过 ISO9001 :2015质量体系认证 ， 核酸酶纯度大于99% ， 酶活性高 ， 且 无 蛋白酶活性 ， 是生物制品生产工艺中常用全能核酸酶的典型代表。

DENARASE® 全能核酸酶 能够降解所有形式的 DNA和RNA，包括单链、双链、线性、超螺旋和环状DNA、RNA及基因组DNA，对核酸序列没有特异性 。 在纯化工艺中使用 DENARASE® 全能核酸酶 ，可有效降低 细胞 裂解液粘度 ， 改善蛋白纯化工艺 ， 高效 去除重组蛋白制品核酸污染 ， 大幅降低终产品污染风险，满足法规要求， 在细胞治疗、病毒载体疫苗等领域应用广泛。 DENARASE®全能核酸酶 的 DMF 已经提交，目前正处 于 审核阶段 。

 

核酸酶 活性 的影响因素 分析

DENARASE®全能核酸酶 在广泛的条件下仍 有 很 强的 生物 酶活性，跟大多数 生物 酶一样， 核酸酶的 活性也会随温度、pH值、 Mg 2+ 、缓冲体系和底物浓度等因素 的改变 而变化 。 为了 更好 的 发挥 核酸酶的 活性 ，帮助使用者更快的 摸索出 适宜的 反应条件 ， 小编为各位 提供一 组 对核酸酶活性影响较大 的 关键 参数 指标 供参考 。 （数据来源于厂家验证指导文件）

 

温度	适宜反应温度为37℃
pH值	适宜 pH值 范围是 8.0-9.0之间
Mg 2+	适宜Mg 2+ 浓度范围是1-2mM
单价阳离子浓度	推荐 Na + 和K + 的浓度在100mM以下
消泡乳化剂	4%的消泡乳化剂对核酸酶活性无明显抑制作用
缓冲系统	高浓度的缓冲体系会抑制核酸酶的活性 Tris盐酸缓冲体系活性大于Tris磷酸盐缓冲体系
底物浓度	DNA 底物浓度 不大于1mg/mL时活性较高

 

1 温度

核酸酶 适宜反应温度为37℃。

2 p H值

不同缓冲体系结果显示， 适宜 pH值 范围 在8.0-9.0之间。

3 Mg 2+

辅助因子 Mg 2+ 适宜 浓度范围是1-2mM，当增大 Mg 2+ 浓度时， 酶活 性 会 下降。

 

4 单价阳离子浓度

单价阳离子的存在会抑制核酸酶的活性，应控制Na + 和K + 的浓度在100mM以下。

5 消泡 乳化剂

消泡 乳化 剂常 被 应用于 工业 生产 的 发酵液中， 实验 结果显示 ， 4%的消泡 乳化 剂对核酸酶活性无明显抑制作用。

 

6 缓冲系统

高浓度的 缓冲体系会抑制核酸酶的活性， 在 Tris盐酸缓冲体系 中酶 活性大于Tris磷酸盐缓冲体系。 随着Tris磷酸盐缓冲体系中磷酸盐浓度的增加，酶活性降低， 然而 Mg 2+ 离子浓度的增加会削弱 其 抑制作用。

DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)

DNA2:Promega,D181A(herring sperm)

DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)

DNA4:Millipore,262015

 

7 底物 种类及浓度

核酸酶对不同来源的DNA底物,降解的DNA片段 长度 不 同 ，下图为 不同来源 DNA底物 ， 浓度 在 1mg/mL 的结果 。为了保持核酸酶的高活性，DNA底物浓度应不大于1mg/mL。

 

 

DENARASE® 全能 核酸酶产品信息

货号	规格	酶活	详情
20804 -1M	1 MU (1,000,000 Units)	＞2 50 U/μl	生产 和 灌装 全部符合 EU GMP 标准 ；适用于 生物制品生产或 有GMP要求 的 应用中 添加。
20804 -5M	5 MU (5,000,000 Units)	＞2 50 U/μl
20804 -100k	100 kU (100,000 Units)	＞2 50 U/μl	生产符合 EU GMP 标准 ，灌装 按照 ISO 9001 标准执行；适用于 生物制品研发 或 没有GMP要求的应用中添加。
20804 -500k	500 kU (500,000 Units)	＞2 50 U/μl

 

DENARASE® 全能核酸酶 重要 参数

c-LEcta GmbH 公司 为了确保DENARASE® 全能核酸酶 的稳定和高质量水平，每个批次 试剂均 满足以下参数的内部验收标准。

酶活: >250 U/μ L

纯度: ≥99%

比活度：＞6*10 5 U/ mg

蛋白酶活性：无

内毒素：＜0.25EU/kU

总菌落数：＜250cfu/200 μ L

 

免费试用进行中

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